小鼠胰島β細胞Min6科研說明書

細胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
①細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代，先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
②培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
③加入1mL胰酶，輕輕晃動皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
④3min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
⑤將細胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
 

產(chǎn)品介紹

生長特性 貼壁

形態(tài) 梭形

培養(yǎng)基 90% RPMI-1640+10%FBS

生長條件 95%空氣+5% 二氧化碳   37攝氏度

凍存條件 90％FBS ＋10％DMSO

污染檢測 支原體、細菌、酵母和真菌檢測結(jié)果為陰性

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞培養(yǎng)詳細步驟

收到常溫細胞后處理方法

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
２. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)２－４小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)．

３. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，貼壁特性(貼壁/懸浮），細胞形態(tài)，所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基．血清比例，所需細胞因子，傳代比例，換液頻率等．

４. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照，記錄細胞生長狀態(tài)．

５. 貼壁細：若細胞生長密度超過８０％，可正常傳代，若未超過８０％，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留５ＭＬ左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達８０％左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松．

６. 懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至５０ＭＬ無菌離心管內(nèi)，１２００rpm離心５min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入５ml培養(yǎng)基吹打．重懸．鏡檢時，基細胞密度超過８０％，可將細胞懸液分至２個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至５ml;若細胞密度未超過８０％，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達８０％左右時再進行傳代操作．

方     式： 詳詢經(jīng)理

小鼠胰島β細胞Min6科研說明書

 內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買提供的*培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實現(xiàn)為科學(xué)研究提供實驗細胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實驗細胞及其子代，不能用于人體實驗和臨床診斷、治療。
2）公司細胞資源中心承諾盡zui大努力對實驗細胞資源相關(guān)信息進行及時更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
3）從文獻等處引用的信息本中心未進行核實，僅供參考。
 

 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。