簡要描述:人正常結腸上皮細胞;NCM460收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好,取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)是否正常,細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
詳細介紹
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人正常結腸上皮細胞;NCM460
細胞英文(簡稱):NCM460
細胞名稱:人正常結腸上皮細胞;NCM460
背景資料
收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好,取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)是否正常,細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
細胞來源:incell
代次:P3
規(guī)格:T25
細胞數(shù):1x10^6 cells
組織來源:結腸上皮
人正常結腸上皮細胞;NCM460形態(tài):貼壁
細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:1640+10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:*建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
動物細胞培養(yǎng),大致的步驟是這樣:
1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配制成細胞懸浮液.把細胞液放到培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)--------原代培養(yǎng).
但是,不要以為這樣就能一直無限培養(yǎng)下去.
因為人正常結腸上皮細胞;NCM460在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖,出現(xiàn)一種接觸抑制.
2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續(xù)增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細胞懸浮液,分開裝到好幾個瓶子里繼續(xù)培養(yǎng)--------傳代培養(yǎng).
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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